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落叶松枯梢病菌检疫技术操作办法

作者: 来源: 时间:2017年03月13日

1 主题内容及应检范围

1.1  本办法规定了落叶松枯梢病菌Botryosphaeria laricinaSawadaShang的检疫检验及检疫处理操作办法。

1.2  本办法适用于林业植物检疫机构对落叶松属Larix spp.的植物活体及有萌生枝梢的原木的检疫检验和检疫处理。

产地检疫

2.1  种苗繁育基地的建立

2.1.1  新建种苗繁育基地应远离疫情发生林分500 m或具有自然隔离屏障。

2.1.2  禁止在落叶松林内或林缘培育苗木(含接穗、插条)。

2.2  踏查

2.2.1  种苗繁育基地、落叶松林,以林间自然界限或选择有代表性的地段进行线路(目测)

踏查。

2.2.2  调查新梢(特别是主梢)是否褪色、凋萎、缢缩,是否大部分针叶脱落,梢端仅残留

一簇枯萎的针叶并弯曲下垂呈钩状。枯梢上是否有黄色松脂块,病皮下生出呈纵向排列

的梭形黑色小点,顶梢残叶或病梢弯曲部分散生近圆形黑色小点。

2.2.3  调查已木质化的发病枝梢、新梢针叶是否全部脱落并呈直立型枯梢。

2.2.4  调查春季发病严重的枯死主梢,其侧芽或小枝是否变为褐色并呈芽枯状,连年发病的

幼树呈扫帚状。

2.2.5  确认有疫情需进一步掌握危害情况的,应设标准地(或样方)做详细调查。

2.3  标准地(或样方)调查

2.3.1  种苗繁育基地样方设置与调查

2.3.1.1  样方累计面积应不少于调查总面积的5%

2.3.1.2  每块样方面积为1 m × 1 m ,采取对角线取样法,抽取样方内的苗木(含接穗、插

条)20 ~ 40株,进行病害分级调查。

2.3.2  林分标准地设置与调查

2.3.2.1  按林分面积设置,20 hm2以下(含20 hm2)设1块,每增加20 hm2,增设1块。

2.3.2.2  每块标准地面积为0.1 hm2,采取对角线取样法,抽取样树30 ~ 50株,调查每株树

上发病枝梢占整个样树枝梢的比例。

2.4  病害分级标准

单株病害分级标准

Ⅰ级  新梢发病率5%以下            代表值0

Ⅱ级  新梢发病率6% ~ 25%          代表值1

Ⅲ级  新梢发病率26% ~ 50%         代表值2

Ⅳ级  新梢发病率51% ~ 75%         代表值3

Ⅴ级  新梢发病率76%以上           代表值4

林分病害分级标准(以感病指数为指准)

  感病指数 5 ~ 20  

  感病指数21 ~ 40

  感病指数41以上。

调运检疫

3.1  抽样比例

3.1.1  苗木(含接穗、插条)按一批货物总件数(株)的5%抽取。

3.1.2  原木一批100根以下的按50 %抽取,100 ~ 300根按40 %抽取,300 ~ 500根按30 %

抽取,500根以上按10 % ~ 20 %抽取。

3.2  抽样方法

3.2.1  苗木(含接穗、插条)按抽样比例,采取分层方式设5个样点抽样检查。

3.2.2  原木表面有萌生枝梢的应直接检查。

3.3  现场检疫

3.3.1  检查苗木(含接穗、插条)梢部是否褪色、有缢缩,是否有典型的钩状或直立状枯梢;

枯梢上是否带有黄色松脂块。

3.3.2  检查叶、梢表面是否有散生的近圆形黑色小点;梢皮下或皮层裂缝中和病皮下有无纵

向排列的梭形黑色小点。

3.3.3 检查原木表面,是否有萌生枝梢及前述小黑点。

检疫检验

4.1  直接检验  用针挑取少许病梢、病苗上的子实体,置加有一滴水的载玻片上,加盖玻

片在显微镜下观察子实体形态,测量大小。

4.2  保湿培养检验

4.2.1  对无明显子实体枝梢,以清洁水浸1 ~ 2 d后,交替浸在35 ℃和10 ℃的清水中进行变温处理2次,每次5 min,再置凉水中浸30 min

4.2.2  取出并置于培养皿内的两根玻棒上,皿底铺含水纱布(或脱脂棉)保湿,在26℃温箱中保湿培养7 ~ 12 d(隔日清洗培养皿1次)后,挑选子实体镜检。

4.3  分离培养检验  1.5 mm长的病组织,用70%酒精或0.1%升汞表面消毒3 min,用无菌水漂洗3次后,置于PDA培养基上,在25 ~ 27℃条件下培养、纯化,4 d后置于散光、16 ~ 25℃条件下培养,2 ~ 7 d后菌落表面可产生分生孢子器和分生孢子。

4.4  致病性检验

4.4.1  以纯培养所得分生孢子或病枝上获得的分生孢子和子囊孢子配成孢子悬浮液。

4.4.2  选择盆栽2 年生健康的落叶松苗,进行针刺、擦伤、涂抹接种,保湿72 h后观察发病症状,并取病斑上的子实体镜检。

4.5  隔离试种检验

4.5.1  经上述检验,不能确定的可疑苗木必须进行隔离试种检验。

4.5.2  隔离试种期限不得少于2 年,经确认无疫后,方可分散种植。

根据上述检验结果,对照病原特征(附件,图1)鉴定是否为落叶松枯梢病菌Botryosphaeria laricinaSawadaShang。落叶松枯梢病与生理枯梢区别见附录2

除害处理

5.1  苗木(含接穗、插条)调运时,经检查带病率在5 %以上的,必须就地全部销毁,5 %以下的(含5 %)须限时重新选苗打捆,经复查合格后方可调运。

5.2  原木及间接带菌材料,须限时逐根清除附带的枝梢并集中销毁,经复查合格后方可调运。

附件1