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药剂药效的测定方法

作者: 来源: 时间:2015年09月16日



测定一种药剂的药效好坏,可通过室内毒力测定和林间药效试验。室内毒力测定主要是测定一种药剂的毒性、毒力或比较几种药剂毒力的大小。室内试验的结果,除可作为药剂的初步筛选的根据外,还可为林间试验提供参考。有时在林间发现的问题必须拿回室内作比较精细的试验研究。林间试验主要测定或比较药剂在林间条件下的药效,其结果比较接近实际情况,为生产防治提供可靠的依据。 
      1.室内毒力测定 
      进行室内试验要注意:①供试生物应该是由同一环境下培养得来的,或采自林间同一环境的,在生理、发育上愈一致愈好。②供试药剂必须纯净(原油或原粉),至少要有确切的有效成分含量。③在控制的条件下进行试验,施药要均匀一致。④试验一般要求每种处理有3-5个重复,每个处理要有50-100头昆虫(菌类孢子一般为在显微镜10×10视野内有100个左右,每次计算必须移动玻片检查3次)。⑤各种试验必须设立对照。所设对照有:完全不处理的(在自然状况下的),即所谓“空白”对照;不含有效成分的制剂或清水对照,用标准药剂处理的对照。 
     (1)杀虫剂的毒力测定方法 
      1)喷雾法:模拟林间实际防治情况下而设计的喷雾方法,为了减少试验误差,使每一个供试昆虫尽量接受到相同的药量,要求喷雾器有一定的压力,使雾点大小一致,喷雾均匀。 
      2)液浸法:将供试昆虫分别放入不同浓度的稀释药液中浸渍一下,立即取出,放在吸水纸上吸去过多的药液,移入每一组的盛器中,给以新鲜叶片作饲料,盛器上加盖纱布或纱网,饲养于室内,记录室温,观察不同时间下中毒死亡情况。 
      3)药膜法:将药剂喷撒在一定面积的表面上,形成一层均匀的药膜(常用垫有滤纸的培养皿,或将针叶在药液中浸渍一下后取出),然后让供试的害虫在上面,任其与药膜接触一定时间后,再移回正常的容器中饲养,或就在接触药膜过程中,观察中毒死亡情况。 
     4)点滴法:用定量的药液微滴,滴加在供试昆虫的胸部背面,然后定时观察中毒死亡情况。此法优点是:剂量可用每克虫体接受的药量(常用微克)表示,药量容易控制,试验误差较小;缺点是费时,处理所用的溶剂、点滴的部位和液滴的大小等都可影响毒力。在采用本法时,应当考虑这些因素,尽量取得一致,才能得到准确的结果。 
     (2)杀菌剂的毒力测定方法 
      1)孢子萌发测定法:将不同的药液喷布于玻片表面或平板上,定量滴加孢子悬浮液,药液接触后,经一定培养时间,镜检孢子萌发的百分率。 
      2)抑菌圈法:将病原菌孢子或菌丝的悬浮液与琼脂培养基混匀,冷凝后,在培养基平面放上消毒的并蘸有不同浓度药液的圆形滤纸片(直径6毫米左右),经定温培养一定时间后,由于药液的扩散作用,使病菌生长受到抑制,即形成“抑制圈”。测量抑制圈的大小,以比较杀菌剂的毒力。 
      3)生长速率测定法:在琼脂培养基中加入药液,冷凝后接菌的方法,经24-48小时后,观察菌落生长情况,计算生长速率,并与不含药剂的对照组生长速度相比较。 
     (3)杀虫剂、杀菌剂的毒力表示方法:药剂的杀虫或杀菌毒力,常用“致死中量”表示,即杀死生物种群半数(50%)所需用的剂量(median lethal dose,毫克/千克)常简写为LD50。如果浓度表示剂量,则为“致死中浓度”,简写为LC50。杀菌剂则以ED50或EC50来表示,即抑制50%孢子萌发所需的剂量或浓度。 
     在测定药剂毒力时,一般常用一系列的剂量(或浓度)对多组生物分别测定死亡百分率,再以不同剂量与相应的死亡率画成“剂量-死亡率毒力曲线”。在纵坐标从死亡率50%处引出一平行于横坐标的线与曲线相交。该处的剂量(或浓度)即为LD50(或为LC50)。但是由于这一曲线是S形的,不易精确地求得LD50或LC50的数值,同时用S形曲线也不易与其他曲线进行比较。因此,必须把这一呈S形曲线改成一条直线,常用统计方法是将剂量用对数值表示,将死亡率用机率值表示,就可以将S形曲线改为一根直线,这一根直线常称“剂量对数-机率值直线”。死亡率查机率(见附表2机率与死亡百分率换算表)。从这一直线的坡度,还可得知供试生物对该种药剂敏感性差异的程度,即坡度越大,表示供试生物个体间差异越小;坡度越小,表示差异越大。 
      室内毒力测定时,在不施药的对照组中,经常出现少数自然死亡的个体,如果自然死亡率在5%以下,一般仅把处理组的死亡率减去自然死亡率即可得到校正死亡率。当自然死亡率达到5%-20%时,就不能用直接相减的方法,应按照下列公式计算处理组的校正死亡率,如果自然死亡率超过20%时,则该批供试生物不宜作试验或试验应重做。 
                          对照组生存率-处理组生存率 
处理组的校正死亡率(%)=---------------------------------×100% 
                                  对照组生存率 

      2.林间药效试验 
      林间药效试验的小区或大区的面积大小,取决于地形条件、林木种类、病虫习性和试验要求。用药处理前后,必须调查病虫害为害程度的变化,通常采用“随机取样”方法调查,常有对角线法、大五点法、棋盘式法、平行线法、分行法等。病虫害发生比较普遍,分布比较均匀,危害较重,可采用五点取样法或棋盘式法;病虫害分布不均衡,形成大小及形状不相同的核心分布型,并自核心向外放射性蔓延,可采用平行线法。取样大小(如标准株数)直接关系到结果的正确程度,应根据具体条件、病虫种类等情况,决定取样大小。例如调查松毛虫虫口密度时,虫口密度大的,抽标准株数少些;虫口密度小的,抽标准株数多些,一般约20-30株。 
      药效试验结果,最常用的是害虫死亡率、虫口减退率、枯梢率等。病害试验结果可用发病率、普遍率、感染指数等表示。一般当害虫虫口密度基本上是一定的,则处理后的虫口数一定减少,而不会增加。对这类害虫试验结果的统计,只要计算死亡率或虫口减退率即可。 

施药前害虫平均活虫数-施药后害虫平均活虫数  
害虫死亡率(或虫口减退率)(%)=-------------------------------------------------×100% 
                                                     施药前害虫平均活虫数 
    

当自然死亡率在5%-20%,应进行校正。为此,在试验设计时应加不施药的对照区,这样就能计算校正死亡率或校正虫口减退率。


                     施药区死亡率(减退率)-不施药对照区死亡率(减退率) 
害虫校正死亡率(%)=-------------------------------------------------------×100% 


                                   100-不施药对照区死亡率(减退率) 
      另一类害虫(主要是蚜、螨)。它们的繁殖力很强,不仅对照区虫口数要比施药前增加,就是施药区的虫口数也有减有增。因此,运用上述校正死亡率或校正虫口减退率(%)公式时,凡遇不施药对照区虫口数增加的,则在公式中改用“+”号。 
      杀菌剂药效试验的调查及结果的处理方法也因病害种类、危害性质而异。如苗期病害,可随机或定点取样,检查一定数量的苗株,计算发病率。根据施药前、后的发病率,计算病害减退率或防治效果。


                           病苗(株、叶、秆)数 
发病率(或普遍率)(%)= ------------------------------×100% 


                              检查苗(株、叶、秆)数 
      有些病害如落针病、叶斑病等,因同一植株上或不同植株上危害程度有轻重之别,可根据落针数或叶上的病斑数,分成若干等级,例如分为0、1、2、3、4、5等六级,级数可按具体情况或多或少。分别检查药剂防治区和不施药对照区的各级病叶数,计算防治区和对照区的病情指数。计算方法如下:


                             ∑(级别代表值×本级病株数) 
病情指数(或感病指数)(%)=--------------------------------×100% 
                                    检查总株数×最高级别代表值 
   

式中:∑是各级乘积数值的总和。 
    用病情指数进一步计算防治效果:


                 对照区病情指数(或发病率)-防治区病情指数(或发病率) 
防治效果(%)= -----------------------------------------------------------×100% 
                                  对照区病情指数(或发病率) 
    

关于除草剂的除草效果可用下式计算:


                 对照区杂草数量(鲜重,克)-施药区杂草残留量(鲜重,克) 
防治效果(%)=--------------------------------------------------------------×100% 
                                   对照区杂草数量(鲜重,克)